[00018710]利用盘基网柄菌表达 Fas 配体

一、项目的特点和技术指标 Fas 配体 (Fas ligand， FasL) 于 1992 年分别由德国和日本研究人员独立发现。 它是 37 kDa 的同源三聚体 II 型跨膜糖蛋白，由一个胞内 N 端、一个跨膜片断和一个胞外 C 端组 成，是一种细胞凋亡因子，属于肿瘤坏死因子家族成员(tumor necrosis factors， TNF)。Fas 配 体通过与它的细胞表面的 Fas 受体 （Fas receptor) 结合可引起 Fas 表达阳性的细胞凋亡，或 称之为程序性细胞死亡，从而杀死病变细胞。Fas 系统（包括 Fas 分子和 FasL 及其信号传导 分子）在恶性疾病中的生物学作用还没有完全了解，但是近年来，随着研究的深入，发现 Fas ligand 的凋亡作用在治疗肿瘤、AIDS、癌症、关节炎等疾病方面有极其重要的作用, 比 如它可作为肿瘤生长的抑制因子。此外，Fas/FasL 系统在通过诱导细胞的凋亡来保持体内环 境的平衡和淋巴细胞的自身忍耐力及免疫力的免疫调节中担当着重要的角色。 Fas ligand 的 缺失将导致淋巴增生及自身免疫疾病。 FasL 主要表达于活性 T 淋巴细胞、NK 细胞及 LAK 细胞等免疫细胞的细胞膜上，此外 在免疫豁免组织(脑、睾丸、眼)的细胞膜上也有 FasL 的天然表达。FasL 也可以可溶性形式 存在。可溶性形式的 FasL 也具有生物活性，并且可与它的膜结合形式竞争性调节细胞的凋 亡。 由于这些细胞培养成本很高，且表达量不高，因而人 FasL 产品的价格昂贵（目前市场 价约为 4000 美元/毫克）。 属于粘菌亚界的聚粘霉纲的盘基网柄菌 （Dictyostelium discoideum）是近年来发展起来 的新型真核表达系统，尤其适合于表达需要翻译后修饰的复杂糖蛋白（如 Fas 配体）。与传 统的表达系统（大肠杆菌、酵母、昆虫细胞和动物细胞）相比，盘基网柄菌表达系统具有巨 大的优越性。利用盘基网柄菌生产重组人 FasL, 不仅可以更好地了解 FasL 的生物功能，而 且可能大大降低生产成本，开发它在药物治疗方面的作用。 二、技术成熟程度 目前已完成了盘基网柄菌的克隆和表达载体的优化，通过高密度培养技术，将 Fas 配 体的表达量提高到了 1 mg L-1 以上，极大地降低了 Fas 配体的生产成本。Fas 配体的纯化、 细胞的中试培养和专利的申请工作即将进行。 三、应用范围 （1）供科研院校及医院作为生化试剂使用。 （2）作为生物药物，用于治疗肿瘤、AIDS、癌症、关节炎等疾病。 四、预期经济效益 目前 Fas 配体的市场价约为 4000 美元/毫克。利用盘基网柄菌表达 Fas 配体，经初步估 算，可将生产成本降低到 500 美元/毫克以下。因此具有极大的经济效益。 五、合作方式 技术转让或联合开发，具体合作方式可商议。