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[00045086]一种免酶切原核线性表达载体及基因快速表达方法
联系人： 中国科学院过程工程研究所
所在地：北京 北京市
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技术详细介绍
摘要：本发明涉及一种高效、快速、免酶切的线性表达载体，及其快速、完整表达蛋白的方法。本方法所提供的无需酶切的线性表达载体含有两个单链粘性末端，分别含有由12和14个核苷酸组成的单链，并含有T7启动子。克隆目的基因时，以带有特异核苷酸的基因片断为引物引物，通过D N A聚合酶进行P C R扩增，然后通过T4D N A聚合酶，产生具有单链的粘性末端。目的基因与线性表达载体带有互补的单链粘性末端，能够在常温迅速连接。本发明操作简单，无需限制性酶切，载体与基因连接效率高，重组蛋白带有HIS-标签，并能通过凝血酶酶切去除，保持蛋白的原始氨基酸序列。本发明能够作为平台技术，用于基因的快速表达、重组蛋白的大量生产。
