[00059616]聚乙二醇干扰素α-2a对慢性乙型肝炎患者肝组织HBVcccDNA、病理及TH17、CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞的影响

乙型肝炎是全球性分布的传染性疾病，我国是肝炎尤其是乙型病毒性肝炎的高发区，10%-20%患有慢性乙型肝炎的病人5年后可发展为肝硬化，发展为失代偿性肝硬化的有20%-23%，失代偿性肝硬化5年生存率仅为14%。肝硬化一旦发展至失代偿期（即终末期肝病阶段）就难以逆转。 抗病毒治疗是慢乙肝治疗的核心，但目前国际公认的抗病毒药干扰素和核苷类似物均有停药后反弹的问题。现有研究认为主要原因是由于肝组织内HBVcccDNA存在。HBV cccDNA是HBV前基因组RNA复制的原始模板，是HBV循环复制以及持续感染的关键因素，但有关药物对肝组织内HBVcccDNA的干预情况目前只有很少的动物实验方面的报道，而且观点不一。 干扰素类药物具有抗病毒和免疫调节双重作用，HBeAg或HBsAg血清学转换率较高，不会引起与治疗药物相关的基因耐药。因此，中国及欧美国家等的乙型肝炎指南明确推荐PEG-IFNα作为慢性乙型肝炎优先选择的药物之一。干扰素较高的血清转化率是否是由于其抑制肝细胞HBVcccDNA的合成，目前研究较少。 Thl7细胞是一种最近发现的不同于Thl和Th2细胞的独立的效应性CD4+T细胞亚群，可以分泌IL-6、IL-17、IL-21、IL-22及TNF-α等多种细胞因子，具有独立的分化和发育调节机制，并以产生IL-17为特征。有研究表明，慢性乙型肝炎患者外周血和肝脏内Thl7细胞均明显增加，而且其增高的程度与肝脏损伤和肝脏病理组织学的严重程度呈正相关。那么，在CHB患者中，Th17细胞是否与CHB患者免疫应答之间存在联系尚不清楚。 HBV感染的慢性化的问题是乙型肝炎防治的一个热点问题，目前认为机体对HBV感染的免疫耐受是其慢性化最主要的原因之一。现在许多学者支持细胞免疫在乙型肝炎的免疫发病机理中占很重要的作用，其中调节性T细胞（Regulatory T cell,Tr）在体外可以抑制HBV特异性T细胞增殖，导致对HBcAg反应低下，尤其CD4+CD25+调节性T淋巴细胞（CD4+CD25+Tr）可以抑制细胞毒性T淋巴细胞（CTL）反应及其功能和IFN-γ的分泌，Foxp3是CD4+CD25+Tr的特异性标志，而Foxp3的表达与CD127低表达相关，故可以用表型为CD4+CD25+CD127low/-T细胞来研究CD4+CD25+Tr更为方便。 本课题通过研究聚乙二醇干扰素α-2a对CHB患者外周血Th17细胞因子、肝组织中的IL-17+细胞及IL-17R+细胞以及对肝组织HBV DNA、HBVcccDNA、病理、CD4+CD25+CD127low/-T细胞的影响和临床效果，探讨聚乙二醇干扰素免疫调节的作用的机制及进一步观察干扰素疗效与上述免疫指标的关系。 计划任务书中的各项指标已完成。 解决的关键技术：治疗前及48周两次肝穿刺活检；实时荧光定量PCR法检测肝组织HBV DNA及HBV cccDNA；流式细胞仪行CD4+CD25+CD127low/-T细胞（CD4+CD25+Tr）标记及检测。 主要创新点：1、是填补利用特异性荧光定量PCR方法定量检测肝内HBVcccDNA技术在我区的空白；2、外周血CD4+CD25+CD127low/调节性T细胞计数下降明显者、肝组织Th17细胞的高表达及外周血IL-17水平高者，预测抗病毒治疗效果可能会较好，对临床选择抗病毒药物，具有一定现实意义，IL-17有望作为临床上预测聚乙二醇干扰素α-2a疗效的指标，有一定的创新性及应用价值；3、前人大多是关于HBVcccDNA的基础和检测方法上的研究，且大多研究来自动物实验，本课题研究聚乙二醇干扰素α-2a对慢乙肝患者肝组织HBVcccDNA的影响，目前研究较少。e抗原阳性慢性乙型肝炎患者在干扰素抗病毒治疗过程中，发生e抗原血清转换者其外周血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞计数较未转换组下降明显，亦可以考虑作为干扰素抗病毒治疗疗效的预测指标。以上成果有望在临床应用。 本课题研究所选择的病例数偏小，循证医学级别不够高，在以后科研设计当中，尽量增加样本量。下一步，本研究小组拟于该项目扩大样本量，并进行3-4年的临床随访研究，观察聚乙二醇干扰素α-2a治疗的远期疗效，及其对HBV病毒的抑制作用，以及与其他抗病毒药物如恩替卡韦的对比研究，展开多中心合作，研究不同抗病毒药物在慢乙肝的抗病毒治疗中的差别，以及干扰素与机体免疫之间的关系等进行进一步地研究。