[00064974]苏氨酸工业生产菌代谢工程系统改造

　　1成果简介
　　本成果从一株高产L-异亮氨酸的C。 glutamicum出发，运用反向代谢工程策略对其代谢通路进行理性重排，以期实现L-苏氨酸高产，特别是近期，通过热诱导丙酮酸羧化酶和苏氨酸外排泵创苏氨酸产率纪录，开发了一种两段式温控发酵苏氨酸的重组大肠杆菌和工艺，发酵罐苏氨酸摩尔转化率达103。28%。这套复杂中心代谢途径的自我调控维持了生产和生长的平衡。论文用实验室前期构建的一株产苏氨酸的重组大肠杆菌TWF001为宿主，首先编辑了涉及副产物有机酸合成、产物降解和转运的基因，并证实这一系列菌种在37度升至42度情况下的生长情况等同正常37度发酵；然后用一套大肠杆菌热敏启动子去转录四环素启动子阻遏蛋白，四环素启动子后的报告基因37度表达，42度不表达。
　　2项目成果
　　氨基酸发酵产业规模在过去十年中整整扩大了一倍，L-苏氨酸（33万吨）是年产量排名前三的氨基酸之一，2014年达33万吨/年，早期的L-苏氨酸生产菌种主要有通过传统育种方法选育而来的粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）、大肠杆菌（Escherichia coli）和谷氨酸棒杆菌（Corynebacterium glutamicum，包括Brevibacterium lactofermentum，Brevibacterium flavum等亚种）（表1-1）。目前，Escherichia coli占主导地位，Corynebacterium glutamicum次之。全世界主要的L-苏氨酸生产企业有日本味之素公司、日本协和发酵工业公司、德国德固赛公司、德国巴斯夫公司和美国ADM公司。这些公司生产的L-苏氨酸占据了全球市场90%的份额。其中日本味之素公司的生产规模最大，多年来占据约60%全球市场份额。此外，韩国希杰公司和印尼三星公司也是老牌L-苏氨酸生产企业。近几年来，随着国内L-苏氨酸项目大批涌现：大成生化、广东星湖、河北梅花、浙江国光、山东恩贝等企业的L-苏氨酸生产线相继投产，这种局面得到了很大的改善，菌株产率和国际竞争厂家相比仍存在着一定差距，本成果对苏氨酸合成进行了系统改造优化，为赶超国际竞争厂家提供了可能。
　　3知识产权
　　一种产多种L氨基酸的基因工程菌及应用，专利号201610853074。9
　　一株高产L-苏氨酸基因工程菌的构建方法及其应用，专利号201910077955。X
　　一种敲除大肠杆菌PTS系统提高L-苏氨酸产量的方法，专利号201910077967。2
　　一种强化脂肪酸降解和乙醛酸循环提高苏氨酸产量的方法，专利号201910077953。0
　　4项目成熟度
　　本成果在200吨级工业发酵罐水平获得20批次成功放大和应用，菌株产率提高至125 g/L，为目前业内最高水平。菌株稳定性好，不使用IPTG诱导剂，不增加培养基和发酵成本，对环境友好。
　　特别是近期开发的两段式温控发酵苏氨酸的重组大肠杆菌和工艺，发酵罐苏氨酸摩尔转化率达103。28%，具有重要应用前景。
　　5投资期望及应用情况
　　目前，全球L-苏氨酸以每年超20%的增长率高速增长，全球市场看好，本成果采用多种技术手段，增强苏氨酸合成主路途径，抑制杂酸途径，并采用新型温度诱导，前景广阔。