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本项目根据球形孢子丝菌的细胞壁特点,联合机械法、化学法、酶解法,设计并开发了适用于球形孢子丝菌胞壁蛋白的粗提方法,该方法可以获得多种胞壁蛋白,回收率高,并可对特异性抗原成分进行进一步纯化(该部分内容已经申请一项国家发明专利)。对粗提的孢子丝菌病患者血清进行了免疫印迹筛选并结合LC/MS方法对蛋白条带的序列进行检测,鉴定出球形孢子丝菌HSP70_l-8和HSP70_5蛋白。利用大肠杆菌原核表达体系构建了HSP70.1-8和HSP70_5表达体系,获得了相应质粒表达的重组蛋白并通过重组蛋白免疫新西兰兔后,获得了高纯度的多克隆抗体(该部分内容已经申请三项国家发明专利)。利用胶体金免疫层析方法,制备出了靶点为三种重组蛋白的孢子丝菌病检测试剂条。
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